- 产品品牌： REAGEN
- 产品货号： REAGEN
- 上市时间： RNS92133
- 产品规格： 50/100T
- 产品适用： 本试剂盒适用于体外定量检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒核酸（HCV DNA）。
- 产地来源： 深圳
- 保质期： 12个月
【产品名称】
通用名称：丙型肝炎病毒（HCV）核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】
50人份/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于体外定量检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒核酸（HCV DNA）。
【检验原理】
本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）结合Taqman技术，对丙型肝炎病毒（HCV）的特异性DNA核酸片段进行荧光PCR定量检测。
【主要成分】
组分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
规格 | 数量 | ||
HCV PCR反应液 |
884μL /管 | 1管 | 引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、缓冲体系 |
HCV酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
HCV内参质控品 | 250μL /管 | 1管 | 内标质粒 |
临界阳性质控品 | 400μL /管 | 1管 | 灭活的HCV阳性血清 |
阴性质控品 | 500μL /管 | 1管 | HCV阴性血清 |
HCV定量标准品1（5.0x107 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 灭活的HCV阳性血清 |
HCV定量标准品2（5.0x106 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 灭活的HCV阳性血清 |
HCV定量标准品3（5.0x105IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 灭活的HCV阳性血清 |
HCV定量标准品4（5.0x104 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 灭活的HCV阳性血清 |
【储存条件及有效期】
试剂置于-30~-15℃避光保存，有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5次。
【适用仪器】
荧光定量PCR仪：ABI 7500荧光PCR仪.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自动医用PCR分析系统。
【样本要求】
1.适用样本类型：人血清或血浆样本
2.样本保存与运送：
上述采集的样本可立即用于检测，或2-8℃保存（不超过24小时），长期保存请置于-20℃。标本运送用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
【检验方法】
1. 样本处理
将待测样本、阳性定量参考品、阴性参考品、临界阳性参考品进行同步处理。取200ul样本各加入内参质控品5ul,按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取。
2. 试剂配置（在准备区进行，与扩增区分开，冰上操作）
注：试剂使用前要完全解冻，使用前涡旋混匀，10000 rpm离心5 s，确保试剂完全离心至管底，否则会出现装量差异的现象。
若有N个待检测样本，按下表要求进行扩增反应液的配制，配制完成后充分震荡混匀，10000 rpm离心5 s。按每管20 μl分装至0.2 ml PCR管中，并做好标记，扩增反应液需现配现用。
N人份(μL) | |
PCR反应液 | N×17 |
酶混合液 | N×3 |
总量 | N×20 |
3. 加样（在样品处理区进行，冰上操作）
按阴性质控品、待测样品、临界阳性质控品、强阳性质控品和阳性定量标准品的加样顺序，分别取5μL，加入至已分装扩增反应液的八联管中，反应总体系为25μL。盖紧管盖，短暂离心后置于荧光定量PCR仪中，并记录样本摆放顺序。
4. 扩增反应（在扩增区进行）
选择FAM通道检测丙型肝炎病毒（HCV）核酸，选择CY5通道检测内标。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。点击样本参数界面，按样本对应顺序设置阴性质控（NTC）、阳性质控以及未知样本(UNK),阳性定量参考品在“样本类型”中选择“标准”，“标准浓度”中输入浓度。
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 逆转录 | 50℃ | 10min | 1 |
预变性 | 95℃ | 3min | ||
3 | 变性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及荧光检测 | 60℃ | 30 sec | |
报告荧光：FAM、CY5；淬灭荧光：NONE。 | ||||
5.质量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（内部质控品） | |
阴性质控品 | UNDET | ≤35 |
临界阳性质控品 | ≤35 | — |
定量标准品 | ≤35 | — |
以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行
6.结果判读
反应结束自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根据实际情况自行调整，Start 值可以在3~15、End 值可设在5~20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis 自动获得分析结果，在Report 界面观看结果，记录未知样本数值（C）。
试验结果判断
6.1如果FAM通道无典型扩增曲线或Ct值>40,CY5通道有典型扩增曲线，Ct值<35,则判定阴性；
6.2如果FAM通道无典型扩增曲线或Ct值>40,CY5通道无典型扩增曲线或者Ct值>35,则需要重新采样检测。
6.3如果FAM通道有典型扩增曲线或Ct值≤40，，则按以下方法判断：
若样本C<100,则该样本的HCV DNA浓度<100IU/mL;
若样本100<C<5.00E+008,则该样本的HCV DNA浓度=C IU/mL;
若样本C>5.00E+008,则该样品的HCV DNA浓度>5x108IU/mL。如果需要精确定量结果，可将样品用阴性质控品稀释到线性范围后再检测。
【检验结果的解释】
1．实验室环境污染，试剂污染，样品交叉污染会出现假阳性结果，如阴性对照检测为阳性，则需做进一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染，需开封新的试剂盒再次进行实验；如为样品交叉污染，应重复实验；如为实验室环境污染，需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。
2．试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降，出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性，应开封新的试剂盒再进行实验。
【检测方法的局限性】
1. 该试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状或体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
2. 当样本的病毒含量低于最低检出限时，可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限，但不能完全排除病毒感染的可能。
【产品性能指标】
1.准确性：企业阳性参考品检测结果全部为阳性，阳性率为15/15。
2.最低检测限：该试剂盒最低检测限为50IU/mL。
3.对不同基因型的覆盖：本试剂盒对常见的HCV6个基因型样本，均可在最低检出限浓度检出为阳性。
4.临床特异性：对10份临床HCV DNA阴性样本进行检测，结果均为阴性。
5.经验证与下列病原体无交叉反应：甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、人乳头瘤病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、水痘带状疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、EB病毒、人巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌。
【注意事项】
1．请严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
2．试剂配制建议在试剂配制区进行，样品处理要求在生物安全柜内操作。临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行。
3．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度，请按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
4．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，切忌开盖。
5．不同批号试剂请勿混合使用，请在有效期内使用试剂盒。
6. 本品仅用于体外诊断。