人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
该试剂盒用于体外定性检测女性宫颈细胞中的人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
- 产品品牌： REAGEN
- 产品货号： RN102FP
- 产品规格： 50/100T
- 产品适用： 该试剂盒用于体外定性检测女性宫颈细胞中的人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
- 产地来源： 深圳
- 保质期： 12个月
【产品名称】
通用名称：人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】
50人份/盒
【预期用途】
该试剂盒用于体外定性检测女性宫颈细胞中的人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
【检验原理】
本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）结合Taqman技术，对人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的特异性DNA核酸片段进行荧光PCR定量检测。
【主要成分】
组分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
规格 | 数量 | ||
HPV16 18反应液 |
1020μL /管 |
1管 | 引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、缓冲体系 |
酶混合液 | 26μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶等 |
HPV16 18阳性对照 | 250μL /管 | 1管 | 含靶基因的重组克隆 |
HPV16 18阴性对照 | 500μL /管 | 1管 | 生理盐水 |
【储存条件及有效期】
试剂置于-30~-15℃避光保存，有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5次。
【适用仪器】
荧光定量PCR仪：ABI 7500荧光PCR仪.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自动医用PCR分析系统。
【样本要求】
1. 适用样本
女性宫颈拭子样本。
2. 采集方法
先用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，用扩阴器扩阴，再换取棉拭子伸入宫颈，通过上皮交界处，直到看不到拭子头，旋转10-20秒，取出拭子，将拭子置于无菌玻璃管中，密闭送检。
3. 样本运输和保存
样本保存：待测样本，可立即进行核酸提取处理；如果样本需要在24小时内检测，可先置于2~8℃保存；如果样本在24小时内无法检测，则可置于-20℃~-80℃保存，尽量避免反复冻融，导致假阴性。
样本运输：采用低温运输，样本运输应遵守国家关于第二类病原微生物的相关生物安全规定。
【检验方法】
1. 样本处理
样本试管中加入1ml生理盐水，充分震荡混匀，按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取，取待测样本、阴性对照、阳性对照各200µL，进行后续提取。
2. 试剂配置（在准备区进行，与扩增区分开，冰上操作）
注：试剂使用前要完全解冻，使用前涡旋混匀，10000 rpm离心5 s，确保试剂完全离心至管底，否则会出现装量差异的现象。
若有N个待检测样本，则需配置N扩增反应，按下表要求进行扩增反应液的配制，配制完成后充分震荡混匀，10000 rpm离心5 s。按每管15μL分装至0.2 ml PCR管中，并做好标记，扩增反应液需现配现用。
N人份(μL) | |
HPV16 18反应液 | N×19.5 |
酶混合液 | N××0.5 |
总量 | N××20 |
3. 加样（在样品处理区进行，冰上操作）
按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序，分别取5μL，加入至已分装扩增反应液的八联管中，反应总体系为25μL。盖紧管盖，短暂离心后置于荧光定量PCR仪中，并记录样本摆放顺序。
4. 扩增反应（在扩增区进行）
选择FAM通道检测HPV 16型核酸，选择ROX通道检测HPV 18型核酸，选择CY5通道检测内标。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 预变性 | 95℃ | 3min | 1 |
2 | 变性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
3 | 退火延伸及荧光检测 | 60℃ | 30 sec | |
报告荧光：FAM、ROX、CY5；淬灭荧光：NONE。 | ||||
5.质量控制
FAM通道Ct值 | ROX通道Ct值 | CY5通道Ct值 | |
阴性对照 | UNDET | UNDET | — |
阳性对照 | ≤35 | ≤35 | ≤35 |
6.结果判读
反应结束自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根据实际情况自行调整，Start 值可以在3~15、End 值可设在5~20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis 自动获得分析结果，在Report 界面观看结果。
FAM通道 | ROX通道 | CY5通道 | 结果判定 | |
1 | Ct值>40 | Ct值>40 | Ct值<35 | 阴性 |
2 | Ct值≤40 | — | 有或无扩增曲线 | HPV 16型 阳性 |
3 | — | Ct值≤40 | 有或无扩增曲线 | HPV 18型 阳性 |
4 | Ct值>40 | Ct值>40 | Ct值>35 | 复检：重新取样检测 |
【检验结果的解释】
1．实验室环境污染，试剂污染，样品交叉污染会出现假阳性结果，如阴性对照检测为阳性，则需做进一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染，需开封新的试剂盒再次进行实验；如为样品交叉污染，应重复实验；如为实验室环境污染，需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。
2．试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降，出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性，应开封新的试剂盒再进行实验。
【检测方法的局限性】
1. 该试剂盒仅为定性产品，不做定量测定。
2. 该试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状或体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
3. 当样本的病毒含量低于最低检出限时，可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限，但不能完全排除细菌感染的可能。
【产品性能指标】
1.准确性：企业阳性参考品检测结果全部为阳性，阳性率为15/15。
2.最低检测限：该试剂盒HPV16型和HPV18型的最低检测限均为500copies/mL。
【注意事项】
1．请严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
2．试剂配制建议在试剂配制区进行，样品处理要求在生物安全柜内操作。临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行。
3．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度，请按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
4．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，切忌开盖。
5．不同批号试剂请勿混合使用，请在有效期内使用试剂盒。
6. 本品仅用于体外诊断。