- 产品品牌: REAGEN
- 产品货号: RNS92049
- 产品规格: 20T
- 产品适用: 禽流感病毒H5N1的检测和判定
- 产地来源: 深圳
【产品名称】
通用名称:禽流感病毒H5N1核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】
50人份/盒
【预期用途】
对样本中流感病毒H5N1亚型RNA进行检测,适用于流感病毒H5N1型感染的辅助诊断及流行病学调查。
【检验原理】
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman技术,对禽流感病毒H5N1亚型的特异性核酸片段进行荧光PCR检测。
【主要成分】
组分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
规格 | 数量 | ||
PCR反应液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、缓冲体系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
阳性对照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的质粒 |
阴性对照 | 500μL /管 | 1管 | 无核酸酶水 |
【储存条件及有效期】
试剂置于-30~-15℃避光保存,有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5次。
【适用仪器】
荧光定量PCR仪:ABI 7500荧光PCR仪.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自动医用PCR分析系统。
【样本要求】
1. 适用样本
咽拭子:应使用专用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位;迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封,以防干燥。
全血:疑似感染动物的静脉血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm离心2min,取适量上清液于1.5mL灭菌离心管中。
2. 样本运输和保存
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【检验方法】
1. 样本处理
取待测样本200ul,按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取。
2. 试剂配置(在准备区进行,与扩增区分开,冰上操作)
注:试剂使用前要完全解冻,使用前涡旋混匀,10000 rpm离心5 s,确保试剂完全离心至管底,否则会出现装量差异的现象。
若有N个待检测样本,则需配置N+2扩增反应(待检样本数N+1个阳性质控品+1个阴性质控品),按下表要求进行扩增反应液的配制,配制完成后充分震荡混匀,10000 rpm离心5 s。按每管20μL分装至0.2 ml PCR管中,并做好标记,扩增反应液需现配现用。
N人份(μL) | |
PCR反应液 | (N+2)×17 |
酶混合液 | (N+2)×3 |
总量 | (N+2)×20 |
3. 加样(在样品处理区进行,冰上操作)
按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序,分别取5μL,加入至已分装扩增反应液的八联管中,反应总体系为25μL。盖紧管盖,短暂离心后置于荧光定量PCR仪中,并记录样本摆放顺序。
4. 扩增反应(在扩增区进行)
选择FAM通道检测H5亚型,选择HEX通道检测N1亚型。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 逆转录 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 预变性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 变性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及荧光检测 | 55℃ | 30 sec | |
报告荧光:FAM、HEX;淬灭荧光:NONE。 |